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HIV-1/HIV-2双重染料法荧光定量PCR试剂盒图片
产品货号:
BTN14-58000
中文名称:
HIV-1/HIV-2双重染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称:
HIV-1/HIV-2 Duplex SYBR qPCR Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品是针对此需求根据染料法荧光定量PCR而建立的一种能同时检测HIV-1 DNA和HIV-2 DNA的试剂盒。


人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)患者血浆中病毒RNA水平一直以来是评判抗病毒治疗效果或预测疾病进展的重要指标。但是,经抗病毒治疗后血浆HIV-1RNA已达到基线水平感染者的血液、精液或淋巴结中仍可以检测到HIV-1DNA的存在,构成病毒储藏库,对清除HIV-1病毒构成严重阻碍。所以在病毒载量已经检测不到的情况下,HIV-1DNA水平可以作为除CD4+T细胞计数和病毒载量之外的另一标志物。

此外,人类免疫缺陷病毒2型(HIV-2)主要流行于西非,其患者血浆中病毒RNA水平一直以来是评判抗病毒治疗效果或预测疾病进展的重要指标。但是,经抗病毒治疗后血浆HIV-2 RNA已达到基线水平感染者的血液、精液或淋巴结中仍可以检测到HIV-2前病毒DNA的存在,构成病毒储藏库,对清除HIV-2病毒构成严重阻碍。所以在病毒载量已经检测不到的情况下,HIV-2前病毒DNA水平可以作为除T细胞计数和病毒载量之外的另一标志物。


  1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
  2. 分别根据HIV-1和HIV-2前病毒保守序列设计的两套专一性引物对,能扩增HIV-1前病毒和HIV-2前病毒,但与其他病毒无交叉反应。
  3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。可在至少6个梯度对对样品中的HIV-1和HIV-2前病毒进行定量分析。
  4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
  5. 提供无传染性的阳性对照,便于分析实验。
  6. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
  7. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。



组分规格
2×qPCR MagicMix500μL
荧光PCR专用模板稀释液1mL
HIV-1/HIV-2双重染料法qPCR引物混合物100μL
HIV-1/HIV-2双重染料法qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL)50μL

保存:-20℃,有效期一年。


一、稀释PCR阳性对照(以102~107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
  1. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
  2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头,下同)。
  3. 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照,充分震荡1分钟,得
    1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
  4. 换枪头,在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
  5. 换枪头,在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
  6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。


二、样品DNA的制备
  1. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×104拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为
    1×105拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要
    200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
  2. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒DNA提取试剂盒或其升级版柱式病毒DNA提取试剂盒。也可以选购本公司免核酸提取的核酸释放剂,其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号BTN61202下载。


三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
  1. 如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液,浓度为10000拷贝/μL)。下面只描述定量分析的步骤,定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个,其余不变。
  2. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):
    成分样品管
    N+2个
    PCR阴性
    对照管
    PCR阳性对照管
    (2~7管)
    2×qPCR MagicMix10μL10μL各10μL
    HIV-1/HIV-2双重染料法qPCR引物混合液2μL2μL各2μL
    自备10×ROX(见注)2μL2μL各2μL
    N+2待测样品DNA模板6μL--
    超纯水-6μL-
    第7步所得PCR阳性对照稀释液(2~7号)--各6μL

    注:仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照,其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX,则用水替代。
  3. 盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数随仪器不不同可能需调整):
    过程温度时间
    预变性95℃5分钟
    PCR反应
    (40个循环)
    95℃15秒
    60℃30秒


四、数据处理
  1. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
  2. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于
    30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35~40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。




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